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Hoechst33258染色液(1mg/mL)是浓缩的储存液，稀释后使用，一般推荐工作浓度为1～5μg/mL，用于固定细胞或组织的细胞核染色。

Hoechst33258也称bisBenzimide H 33258或HOE 33258，分子式为C25H24N6O·3HCl，分子量为533.88，CAS号23491-45-4。Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低，常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测，Hoechst 33258也用于普通的细胞核染色、DNA染色。Hoechst33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm，Hoechst33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。

• Hoechst 33258染色液(1mg/mL)应稀释至合适的浓度后使用。
  
• 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽快检测，活细胞或组织染色后宜立即观察。
  
• 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
  
• 避免反复冻融，否则容易失效。
  
• Hoechst 33258对人体有一定刺激性，请注意适当防护。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 固定的组织细胞染色
  
  • 根据实验具体要求，用无菌去离子水稀释到自己所需浓度，即为Hoechst 33258染色工作液；细胞核染色时一般推荐工作浓度为1～5μg/mL。
    
  • 于细胞或组织样品，固定后冲洗去除固定剂；如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst33258染色，如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33258染色；对于贴壁细胞或组织切片，加入少量Hoechst 33258染色液，覆盖住样品即可；对于悬浮细胞，至少加入待染色样品3倍体积以上的Hoechst 33258染色液，充分混匀。
    
  • 室温放置5～8min。
    
  • 轻轻吸除Hoechst 33258染色液。
    
  • 用无菌的PBS或生理盐水清洗2～3次，每次3～5min。
    
  • 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。
• 活细胞染色
  
  • 根据实验具体要求，用无菌去离子水稀释到自己所需浓度，即为Hoechst33258染色工作液。细胞核染色时，一般推荐工作浓度为1～5μg/mL。
    
  • 取96、24、6孔板培养细胞至合适状态，按96孔板加入100μL、24孔板加入500μL、6孔板加入1mL的比例，加入适当的Hoechst33258染色液，染液必须充分覆盖细胞。
    
  • 在适宜于细胞培养的条件下培养20～30min。
    
  • 轻轻吸除Hoechst33258染色液。
    
  • 用无菌的PBS或生理盐水清洗2～3次，每次3～5min。
    
  • 进行荧光检测。